Verschillende enzymen die vaak worden gebruikt in PCR-experimenten

Polymerasekettingreactie, afgekort alsPCRin het Engels is een techniek uit de moleculaire biologie die wordt gebruikt om specifieke DNA-fragmenten te amplificeren.Het kan worden beschouwd als een bijzondere DNA-replicatie buiten het lichaam, waarbij een zeer kleine hoeveelheid DNA enorm kan worden vergroot.Gedurende het gehelePCRreactieproces speelt één klasse stoffen een cruciale rol: enzymen.

1. Taq-DNA

In experimenten in de begindagen vanPCR, gebruikten wetenschappers Escherichia coli DNA-polymerase I, maar er is een probleem met dit enzym: het moet elke keer dat een cyclus wordt uitgevoerd een nieuw enzym aanvullen, wat de operatiestappen enigszins ingewikkeld maakt en het moeilijk is om volledig automatisch te amplificeren.Dit probleem werd opgelost nadat wetenschappers in 1988 per ongeluk Taq DNA-polymerase uit Thermus Aquaticus isoleerden. Sindsdien is de automatische amplificatie van DNA een realiteit geworden.De ontdekking van dit enzym maakt ookPCRtechnologie een handige, praktische en universele technologie.Momenteel is Taq DNA-polymerase het meest voorkomende polymerase in DNA-kits.

2. PfuDNA

Zoals hierboven vermeld, heeft Taq DNase een grote bug, dus hebben wetenschappers Taq DNA-polymerase tot op zekere hoogte aangepast om niet-specifieke amplificatie als gevolg van mismatching te voorkomen, wat resulteert in onnauwkeurige testresultaten.Maar de modificatie van Taq DNA-polymerase kan de activiteit van DNA-polymerase bij kamertemperatuur remmen.PfuDNA-polymerase kan de bovengenoemde nadelen van Taq DNA-polymerase goed compenseren, zodat de PCR-reactie normaal kan worden uitgevoerd en het succespercentage van doelgenamplificatie effectief kan worden verbeterd.

3. Omgekeerde transcriptase

Reverse transcriptase werd ontdekt in 1970. Dit enzym gebruikt RNA als matrijs, dNTP als substraat, volgt het principe van basenparing en synthetiseert een enkele DNA-streng die complementair is aan de RNA-matrijs in de 5'-3'-richting.Reverse transcriptase is voornamelijk afhankelijk van DNA-polymerase-activiteit van DNA- of RNA-templates en heeft daarom geen 3'-5'-exonuclease-activiteit.Het heeft echter RNase H-activiteit, die de syntheseduur van reverse transcriptase tot op zekere hoogte beperkt.Vanwege de lage betrouwbaarheid en thermostabiliteit van wilde reverse transcriptase hebben wetenschappers het ook aangepast.

VoorPCRexperimenten zijn de belangrijkste verbruiksartikelen: individuele PCR-buis, 4/8-strip PCR-buis, PCR-platen.

Labio'sPCR-verbruiksartikelenheb het volgendevoordelen:

PCR-platen: Brede compatibiliteit met thermische cyclers;Contrastrijke, gemakkelijke bronidentificatie;goed fluorescentie reflectie;goedwarmteoverdracht;Gecertificeerde DNase-, RNase-, DNA-, PCR-remmers en pyrogeenvrij getest.

Individuele PCR-buisjes: Verdampingsbestendig;goedwarmteoverdracht;uitstekende optische helderheid; gecertificeerde DNase-, RNase-, DNA-, PCR-remmers en geteste pyrogeenvrij.

4/8-strips PCR-buisjes: Ultradunne wanden; hoge helderheid; goede fluorescentiereflectie;kan worden gebruikt in de farmaceutische industrie, de voedingsindustrie en de moleculaire biologie; hoogwaardig, nieuw PP-materiaal; gecertificeerde DNase-, RNase-, DNA-, PCR-remmers en getest pyrogeenvrij.